Resumo Em bovinos, infecções por Trypanosoma vivax geram sinais clínicos inespecíficos que, associados a intervalos aparasitêmicos, faz com que o diagnóstico da enfermidade seja desafiador. No Brasil, somente aceturato de diaminazeno e cloridrato de isometamidum (ISM) estão disponíveis para o tratamento da tripanossomose bovina. Este trabalho teve como objetivo acompanhar bovinos leiteiros naturalmente infectados por T. vivax, após o tratamento com ISM por meio de técnicas moleculares e sorológica. Foram utilizados 30 bovinos naturalmente infectados com T. vivax, sendo estes tratados com duas aplicações de ISM, na dosagem de 1,0 mg/kg por via intramuscular profunda, nos dias 0 e 150. Foram avaliadas, para diagnóstico de T. vivax, amostras de sangue acrescido de EDTA e soro, colhidas nos 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 dias após os tratamentos pela reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificação circular isotérmica do DNA (LAMP) e ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA). Verificou-se a presença de animais com persistência na detecção de DNA de T. vivax pela PCR e LAMP, bem como detecção contínua de anticorpos IgG anti-T. vivax pelo método de ELISA, sugerindo a presença de resistência de T. vivax ao ISM. A combinação dos testes LAMP e ELISA pode evitar falsos diagnósticos da eliminação do parasita nos bovinos tratados, contribuindo para um melhor controle da doença. Este é o primeiro experimento que demonstra infecção persistente do T. vivax em rebanho naturalmente infectado, tratado com ISM, e evidencia possível resistência ao quimioterápico no Brasil.

Abstract Trypanosoma vivax infections cause nonspecific clinical signs in cattle associated with aparasitemic intervals, making disease diagnosis a challenge. In Brazil, diminazene aceturate and isometamidium chloride (ISM) are available to treat bovine trypanosomosis. The objective of this study was to follow-up, by molecular and serological techniques, dairy cattle naturally infected by T. vivax after ISM treatment. Thirty cattle naturally infected with T. vivax received two applications of ISM, at a dosage of 1.0 mg/kg intramuscularly, on days 0 and 150. For T. vivax diagnosis, EDTA-blood and serum samples were evaluated on 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, and 240 days after treatment PCR, Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and ELISA. Animals with persistent detection of T. vivax DNA by both PCR and LAMP were found and continuous detection of anti-T. vivax IgG antibodies by ELISA, suggesting the presence of T. vivax resistance to ISM. The combination of LAMP and ELISA tests can prevent misdiagnosis of the parasite clearance in treated cattle, contributing to better disease control. This is the first experiment that demonstrates the persistence infection of T. vivax under ISM treatment in a natural infected herd and evidence of ISM chemotherapy-resistant T. vivax in Brazil.

Resumo Os objetivos neste estudo foram descrever ocorrências do nematódeo Rhabditis spp., causando otite parasitária em bovinos leiteiros da raça Gir no estado do Espírito Santo, sudeste do Brasil, e avaliar o controle biológico desse nematódeo utilizando os fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001) e Monacrosporium thaumasium (NF34). Após a detecção e coleta dos nematódeos, três grupos foram formados: dois grupos que foram tratados com os isolados fúngicos, respectivamente; e um grupo controle, sem fungos. Os tratamentos foram os seguintes: (a) placas de Petri contendo o meio de cultura 2% ágar de água (WA) + 250 nematoides + AC001; (b) placas de Petri contendo 2% de WA + 250 nematoides + NF34; e (c) placas de contendo apenas 2% de nematódeos WA + 250. Após sete dias a 27 °C os tratamentos com fungos foram capazes de capturar e destruir os nematódeos, com porcentagens de 82,0% (AC001) e 39,0% (NF34) em relação ao grupo controle. Os resultados demonstram a ocorrência de Rhabditis spp., no Estado do Espírito Santo e a eficácia da atividade predatória in vitro dos isolados fúngicos utilizados. Assim, esses resultados são importantes, pois podem auxiliar no controle alternativo in vivo de Rhabditis spp. em bovinos com otite parasitária.

Abstract The objectives of this study were to describe occurrences of Rhabditis spp. causing parasitic otitis in dairy cattle of Gir breed in the state of Espírito Santo, southeastern Brazil, and to evaluate the biological control of this nematode using the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001) and Monacrosporium thaumasium (NF34). After nematode detection and collection, three groups were formed: two groups that were treated, respectively, with the fungal isolates; and a control group, without fungus. The treatments were as follows: (a) Petri dishes containing the culture medium 2% water agar (WA) + 250 nematodes + AC001; (b) Petri dishes containing 2% WA + 250 nematodes + NF34; and (c) Petri dishes containing only 2% WA + 250 nematodes. After seven days at 27 °C the treatments with fungi were able to capture and destroy the nematodes, with percentages of 82.0% (AC001) and 39.0% (NF34) in relation to the control group. The results demonstrate the occurrence of Rhabditis spp. after animals physical examination and that there was efficacy of the in vitro predatory activity of both fungal isolates. Thus, these results are important because they can assist in future in vivo control of this nematode in cattle.

Resumo Infecções por Trypanosoma vivax têm ocorrido com frequência crescente em animais de produção, principalmente pela aquisição de animais com infecções subclínicas e sem aparente parasitemia, o que dificulta o diagnóstico. O objetivo do presente estudo foi avaliar várias técnicas empregadas para o diagnóstico de T. vivax, a fim de verificar a melhor maneira de utilizá-las durante o curso da doença. Os métodos moleculares demonstraram maiores taxas de detecção que os métodos parasitológicos, detectando 33 das 54 (61,1%) amostras sabidamente positivas, enquanto a técnica de hemoconcentração (melhor teste parasitológico) detectou apenas 44,4%. Os métodos sorológicos, RIFI e ELISA, detectaram soropositividade em 51 das 54 (94,4%) e 49 das 54 (90,7%) amostras sabidamente positivas, respectivamente. Apesar de serem altamente sensíveis, estes testes apenas demonstram a exposição ao agente infeccioso, e não indicam se a infecção permanece ativa. O presente estudo foi o primeiro a utilizar a qPCR para um isolado sul-americano, melhorando sua detecção e quantificação. Além disso, as análises revelaram que a fase patente da doença pode se estender por até 42 dias após a infecção, sendo maior que anteriormente relatado. A combinação de várias técnicas de diagnóstico pode evitar a frequência de resultados falso-negativos e contribuir para um melhor controle da doença.

Abstract Livestock infections by Trypanosoma vivax have been occurring with increasing frequency, mainly due to the presence of animals with subclinical infections and without apparent parasitaemia, making diagnosis challenging. The aim of the present study was to evaluate several techniques used for T. vivax diagnosis in order to assess the best way of using them during the course of the disease. Molecular methods demonstrated higher rates of detection than parasitological methods, detecting 33 of the 54 (61.1%) known positive samples, while the hematocrit centrifugation technique (best parasitological test) detected only 44.4%. The serological methods, IFAT and ELISA, detected seropositivity in 51 of the 54 (94.4%) and 49 of the 54 (90.7%) known positive samples, respectively. Despite being highly sensitive, the latter only demonstrates exposure to the infectious agent and does not indicate whether the infection is active. The present study was the first to use the qPCR for a South American isolate, improving disease detection and quantification. Furthermore, the analyses revealed that the patent phase of the disease may extend up to 42 days, longer than previously reported. The combination of several diagnostic techniques can lower the frequency of false negative results and contributes toward better disease control.

Resumo Tripanossomíase causada por Trypanosoma vivax tem sido reportada em várias regiões do Brasil na última década. Um surto é aqui reportado no Estado de Goiás, de maio de 2016 a janeiro de 2017. O início do referido surto ocorreu na cidade de Ipameri (Goiás) depois da introdução de 18 vacas Girolando, provenientes do Estado de Minas Gerais. Pelo exame parasitológico direto (esfregaço sanguíneo) e pela reação em cadeia pela polimerase, identificou-se a infecção por T. vivax nos animais. Cinquenta e uma vacas de um rebanho de 161 foram infectadas; 12 morreram durante o surto e 44 animais permaneceram positivos (pelo esfregaço sanguíneo) mesmo recebendo tratamento químico (diminazene), e foram descartadas. Após esse primeiro caso, foram detectados outros cinco casos no Estado de Goiás. A disseminação dessa doença pode estar ligada à comercialização de animais portadores de T. vivax, aliada à prática de transmissão iatrogênica, utilizando-se uma única agulha e seringa para, todas as vacas, durante a administração da oxitocina antes de cada ordenha.

Abstract Trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax has increased the reports in Brazil in the last decade. An outbreak is herein first reported in the state of Goiás, from May 2016 to January 2017. The outbreak start occurred in the city of Ipameri (Goiás) after the introduction of 18 auctioned cows from the state of Minas Gerais. Direct parasitological test (blood smears) and polymerase chain reactions targeting the catL genes diagnosed T. vivax infection. Fifty six cows from a herd of 161 were infected; 12 died during the outbreak and 44 animals persistently positive (by blood smears) even after chemical treatment were discarded. After this first case, five other cases were detected in state of Goiás. The spread of this disease can be linked to the commercialization of animals carrying T. vivax, allied to the iatrogenic transmission practice, using a single needle and syringe for all cows, during oxytocin administration before each milking.

Resumo A transmissão transplacentária é a principal via de infecção do Neospora caninum nos rebanhos bovinos em todo o mundo. O presente estudo teve como objetivo determinar a frequência da transmissão transplacentária do parasita em bovinos leiteiros do Agreste Pernambucano, por meio de testes sorológicos (RIFI e ELISA). Foram analisadas 316 amostras de soro de fêmeas bovinas (vacas e novilhas) e de suas crias. A taxa de transmissão transplacentária pela RIFI foi de 72,22% (13/18) para vacas e 69,23% (9/13) para as novilhas. O ELISA teste mostrou taxa de transmissão transplacentária de 43,58% (17/39) para as vacas e 50% (9/18) para as novilhas. As taxas de transmissão transplacentária foram similares para os dois testes em geral, porém uma maior soropositividade foi encontrada nas vacas pela RIFI. Os dados foram estatisticamente analisados pelo teste de qui-quadrado e teste exato de Fischer. Foi encontrada uma relação significativa de dependência entre a soropositividade das mães e de suas crias. Os títulos de anticorpos anti- N. caninum foi de 200 na RIFI e posicionados entre o nível quatro (vacas) e cinco (novilhas e bezerros) pelo ELISA. Pela correlação de Spearman, não foi observada associação entre a magnitude de títulos de anticorpos anti- N. caninum de fêmeas com o de suas crias. O teste de concordância kappa revelou um índice de 0,35, indicando uma concordância leve entre os testes sorológicos utilizados. O estudo sugere que vacas e novilhas são as principais transmissoras do N. caninum na região estudada, sendo a transmissão vertical, a principal forma de transmissão do agente em rebanhos leiteiros do Agreste de Pernambuco.

Abstract The transplacental transmission is the primary route of Neospora caninum infection in bovine herds around the world. This study aimed to determine the frequency of transplacental transmission of the parasite in dairy cattle of Agreste region of Pernambuco through serological tests (IFAT and ELISA). Three hundred sixteen serum samples from cows and heifers and their offspring were analyzed. The transplacental transmission rate was 72.22% (13/18) for cows and 69.23% (9/13) for heifers by IFAT. ELISA test showed transplacental transmission rate of 43.58% (17/39) for cows and 50% (9/18) for heifers. The transplacental transmission rates were similar, in both groups in test, but a higher seropositivity was found in cows by IFAT. Data were statistically analyzed using the chi-square and Fisher’s exact test. A significant relationship of dependence between seropositivity of mothers and their offspring was found. The more frequent IFAT antibody titers and ELISA levels for N. caninum were, respectively, 200 and between four (cows) and five (heifers and offspring). In the Spearman correlation, no association was found between the magnitude of antibody titers for N. caninum between mothers and their offspring. The kappa test showed an index of 0.35, indicating a mild correlation between the serological tests used. The study suggests that cows and heifers are the main transmitters of N. caninum in the studied region and that vertical transmission is the major form of transmission in dairy herds of the Agreste region of Pernambuco.

Resumo Infecções pelo Trypanosoma vivax causam grandes prejuízos à pecuária na África e Américas Central e do Sul. Surtos devido a este protozoário têm ocorrido com frequência cada vez maior no Brasil. O conhecimento das alterações provocadas pelo T. vivax durante a evolução desta enfermidade podem ser de grande valia para o auxílio no diagnóstico. Para tanto foram estudados os sinais clínicos, parasitemia, alterações hematológicas e bioquímicas em bovinos experimentalmente infectados por este hemoparasito. Foram verificadas duas fases distintas durante a infecção, uma aguda onde parasitos circulantes foram vistos durante todo o período, e posteriormente uma crônica, onde foram detectadas flutuações na parasitemia, com períodos aparasitêmicos. Foi verificada constante diminuição da contagem global de eritrócitos, teor de hemoglobina e volume globular (VG). O leucograma revelou leucopenia por neutropenia e linfopenia durante a fase aguda da enfermidade. Foram observados diminuição do colesterol, albumina, aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e aumento da glicose, globulinas, proteínas e fosfatase alcalina (FA). O isolado “Lins” de T. vivax apresentou patogenicidade para bovinos, verificando-se parasitemia intensa nos estágios iniciais da infecção, sendo detectados parasitas circulantes por aproximadamente dois meses. As alterações laboratoriais mais evidentes foram encontradas nos parâmetros do leucograma, ainda destacando-se um quadro de trombocitopenia.

Abstract Infections by Trypanosoma vivax cause great losses to livestock in Africa and Central and South Americas. Outbreaks due this parasite have been occurred with increasing frequency in Brazil. Knowledge of changes caused byT. vivax during the course of this disease can be of great diagnostic value. Thus, clinical signs, parasitemia, hematologic and biochemical changes of cattle experimentally infected by this hemoparasite were evaluated. Two distinct phases were verified during the infection – an acute phase where circulating parasites were seen and then a chronic phase where fluctuations in parasitemia were detected including aparasitemic periods. A constant reduction in erythrocytes, hemoglobin and packed cell volume (PVC) were observed. White blood cells (WBC) showed pronounced changes such as severe neutropenia and lymphopenia during the acute phase of the illness. Decreases in cholesterol, albumin, aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH), and increases in glucose, globulin, protein, and alkaline phosphatase (ALP) were observed. The “Lins” isolate of T. vivax showed pathogenicity for cattle, and intense parasitemia was detected in the early stages of infection. Circulating parasites were detected for about two months. The most evident laboratory abnormalities were found in WBC parameters, including thrombocytopenia.